一、常规操作
1. 穿着专用实验服,佩戴口罩。严禁细胞培养室的实验服外穿。
2. 穿着专用拖鞋。专用拖鞋禁止在细胞房外的范围使用,在准备间更换自己的拖鞋,并整齐至于鞋架上,禁止随地乱放。
3. 每间细胞培养室最多可6人同时使用,尽量避免在缓冲间走动、停留以及在室内长时间逗留、交谈。
4. 严禁同时打开进入细胞房缓冲间的门和操作间的门,进门后要随手关闭。
5. 请自行准备实验所使用的细胞、试剂、耗材等个人物品,整齐摆放保存并清理清洗;存放的物品必须标注清晰(实验样品标注格式:样品名+姓名+时间),如无标签,将被定期清理。未经本人允许,请勿私自使用他人物品。
6. 细胞培养室所有的公用设备均需登记使用,每台设备的具体使用要求见下文。
7. 未经许可不得私自带他人进入培养室,否则将取消使用权。
二、培养箱使用规则
1. 从培养箱取放物品前,用酒精清洁双手(戴手套),尽量缩短开门时间和减少开门次数。严禁打开培养箱门后交谈。
注: 培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱,容易造成污染。
2. 培养器皿放入培养箱前,用酒精消毒表面,并稍等至酒精挥发后再放入,以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。
3. 按课题组抽签决定培养箱位置的使用,确定后按预定位置摆放培养器皿,若不按规定位置存放,责任自负。
4. 普通培养中的细胞,若非实验需要,每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次,2人以上共用的细胞,可约好时间一起观察。
注:频繁将细胞拿出观察,容易给培养箱造成污染,同时也会影响细胞生长条件的恒定。
5. 培养箱报警需立即关上培养箱的门,待CO2浓度和温度回升后才能再次打开。
1. 显微镜使用前,用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。
2. 离开细胞房时或较长时间不需使用时,及时关上电源。尽量避免频繁开关显微镜电源。
四、超净台操作规则
1. 超净台使用遵循预约原则。无预约者若有必要在他人预约时段内使用,需先征得预约者的同意,否则应无条件让出工作台,以免耽误他人实验。
2. 超净台使用前用紫外灯照射30分钟灭菌,使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒,所有物品放入超净台内使用前均应消毒。
3. 点燃酒精灯前需检查瓶中酒精是否足够,液面应占瓶高1/3-2/3。
注:消毒用75%的酒精,酒精灯用95%的酒精,向喷壶或灯内添加酒精时请留意。
4. 超净台中应摆放废液杯和废品杯各一只,用于暂时存放废弃物,实验结束后将杯内垃圾倒入消毒桶(盛次氯酸)浸泡过夜。
注: 消毒桶内物品由值日生每隔一天负责放进灭菌锅灭菌,使用者实验结束后若发现桶已装满,请通知值日生。
五、灭菌锅操作规则
1. 持特种设备操作人员证的师生才能使用细胞房配置的灭菌锅,无证人员不得操作。
2. 灭菌用水必须使用蒸馏水,或纯水、去离子水、二次水等。
3. 待灭菌的物品放置不宜过紧,只能对耐压耐温耐湿的物质进行灭菌,不可对强酸、强碱、盐水、易燃、易爆、易氧化物灭菌。
4. 必须将冷空气充分排除,否则锅内温度达不到规定温度,影响灭菌效果。
5. 灭菌完毕后,不可放气减压,否则瓶内液体会剧烈沸腾,冲掉瓶塞外溢甚至导致容器爆裂。须待灭菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖。
6. 如果灭菌后的培养基在锅内不及时拿出,需在蒸汽放尽后将盖打开,切忌将培养基封闭在锅内过夜。
7. 操作过程,请注意安全,小心烫伤。
六、值日生工作职责
1. 每周值日生时间从周一开始,至周日结束。
2. 每天早上值日生需:检查培养箱内水量是否足够(切记给培养箱换灭菌后的水);二氧化碳罐压力是否在正常范围;液氮罐是否需加液氮;检查消毒桶是否已装满。
3. 每周日打扫细胞房:拖地(消毒水拖地),擦桌子(75%酒精擦拭实验台面及上门所有仪器)、清洁和整理抽屉,擦超净台、冰箱及桌上的仪器,洗细胞培养室专用的实验服和拖鞋。
4. 每周日晚打开房间紫外灯,照射过夜,第二天关闭后通风30 min可进入细胞房工作。
5. 每2周清洁一次培养箱:先将培养箱中的物品取出暂存于超净台内;将培养箱内的不锈钢板取出(横板),用酒精棉球清洁钢板和培养箱内壁;打开培养箱清洁内壁时动作要迅速,避免长时间敞开门使得大量不洁净空气进入,缩短过滤器的寿命。
6. 超低温冰箱每周除一次冰,清洗散热网。
7. 灭菌锅每周日排放一次灭菌腔内的水,同时清洗灭菌腔体;每周日用干净抹布,擦拭灭菌腔底的水位传感器上的污垢,防止水位传感器被腐蚀,造成加热管干烧;每周日取出水位板,观察加热管表面是否干净。如有污垢应用软毛刷擦洗并冲水。
若违反以上规则,一经发现禁用细胞间一个月。